菌落PCR(ColonyPCR)可不必提取目的基因DNA,不必酶切鑒定,而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,省時(shí)少力。建議使用載體上的通用引物來(lái)篩選陽(yáng)性克隆。通常利用此pcr的方法進(jìn)行篩選插入的目的基因或者DNA測(cè)序分析。zui后的PCR產(chǎn)物大小是載體通用引物之間的片斷大小。
菌落PCR與我們通常的普通DNA的PCR的不同在于,菌落pcr直接以單個(gè)菌作為模板。是一種可以快速鑒定菌落是否為含有目的基因的陽(yáng)性菌落。操作簡(jiǎn)單,快捷,靈敏度高,是有別于酶切驗(yàn)證的方法。
菌落PCR的制備方法
1.菌落PCR DNA的制備:
挑取新鮮單菌落置于 30μl 0.2%SDS 中;velp漩渦混合器上混勻15 秒;90℃熱激4min;4℃ 13000rpm×1min,離心,取上清液20μL 至新的無(wú)菌離心管中,-20℃保藏。
2.菌落PCR的制備
挑取新鮮單菌落置于 20μl 水中;velp漩渦混合器上混勻15 秒;取5μl 作為PCR模板,剩余菌液放-20℃保藏。
對(duì)于菌落PCR實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)員來(lái)說(shuō),一天的樣品的制備量非常大,選擇一款快捷、省力的漩渦混合器十分必要。同時(shí)選擇一款穩(wěn)定、的漩渦混合器也備顯重要。
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