實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>

　　1．掌握FISH技術(shù)的一般原理，及其基本實(shí)驗(yàn)方法；　

　　2．了解FISH技術(shù)的發(fā)展概況，以及應(yīng)用范圍。

實(shí)驗(yàn)原理

FISH是以分子雜交為基礎(chǔ)，應(yīng)用非放射性熒光物質(zhì)標(biāo)記核酸探針，通過堿基互補(bǔ)的原理與靶DNA雜交，在核中或染色體上顯示靶DNA序列位置的方法。FISH技術(shù)可分為四個(gè)步驟：樣品制備、探針標(biāo)記、雜交及其檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

　　1．材料染色體標(biāo)本或血涂片

　　2．儀器低溫高速離心機(jī)、熒光顯微鏡、VELP漩渦混勻器、移液器、恒溫水浴鍋、培養(yǎng)箱、烤箱

實(shí)驗(yàn)方法與步驟　　

　　 1．探針混合與變性

　　（1）混合20～60ng標(biāo)記探針DNA和3～5μg鮭精DNA。反應(yīng)后體積少于10μl，可直接凍干；若體積較大，可加1/20體積的3mol/L乙酸鈉和2倍體積100%乙醇沉淀DNA。混勻并于-70℃30min。在4℃，12000r/min離心10min，棄上清，沉淀物以300μl70%乙醇洗滌后在離心（同上），棄上清，凍干。

　　（2）將DNA重懸于5μl去離子的甲酰胺中，室溫旋渦混勻3min。

　　（3）加入5μl雜交緩沖液，漩渦混勻器中混勻5min。

　　（4）將DNA探針置于75℃水浴中變性5min。迅速置于冰浴中5min，備用。　

　　 2．樣本處理

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